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PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)

基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱PCR實(shí)驗(yàn)，其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域，如：檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、禽疫病，癌基因的檢測(cè)和診斷，DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子鑒別及法醫(yī)物證，動(dòng)、植物檢疫，動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品檢測(cè)，動(dòng)物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測(cè)等。

PCR設(shè)計(jì)依據(jù) 

《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理法》 

《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》GB50346-2004 

《潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范》GB50073-2001 

《高效空氣過(guò)濾器》GB13554-92 

《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》GB19489-2004 

《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》WS233-2002 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部 

PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局 

基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室又稱PCR實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域，前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)。實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)->樣品處理區(qū)->擴(kuò)增區(qū)->擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，不得逆向流動(dòng)。各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)置緩沖間，工作間與緩沖間之間宜安裝連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗(yàn)工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的工作室，并有明顯的標(biāo)志，各區(qū)間不能直通。各區(qū)之間如果是緊密相連，需安裝物品傳遞窗。每個(gè)工作區(qū)域的頂部應(yīng)安裝紫外燈，紫外燈的波長(zhǎng)為254 nm，安裝數(shù)量為每20 m2安裝一支40W的紫外燈。 

     實(shí)驗(yàn)室較為理想的布局模式為有一個(gè)專用走廊，試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)很規(guī)范地排列在一起，前三個(gè)區(qū)各有一個(gè)緩沖間，可供換工作服和工作鞋使用，頂上可裝一紫外燈。內(nèi)實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)為正壓或常壓狀態(tài)，緩沖間內(nèi)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài)（可上設(shè)一抽風(fēng)裝置），使這三個(gè)區(qū)的空氣流向?yàn)橛蓪?shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)向外，緩沖間內(nèi)通向內(nèi)實(shí)驗(yàn)室和走廊的門(mén)可安裝一種連鎖裝置，當(dāng)一個(gè)門(mén)打開(kāi)時(shí)，另一門(mén)必須處于關(guān)閉狀態(tài)，防止出現(xiàn)兩個(gè)門(mén)同時(shí)打開(kāi)的情況。產(chǎn)物分析區(qū)可不設(shè)緩沖間，但應(yīng)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài)（裝一個(gè)排風(fēng)扇即可），使空氣流向由外向內(nèi)，以防止擴(kuò)增產(chǎn)物的隨空氣流出。每一區(qū)域都須有明確的標(biāo)記，工作按試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)至產(chǎn)物分析區(qū)單一流向進(jìn)行，各區(qū)的儀器設(shè)備包括工作服、鞋、實(shí)驗(yàn)記錄本和筆等都必須專用。 

如果無(wú)法作到以上模式，以下基本要求必須做到： 

1.四個(gè)區(qū)域必須是相互獨(dú)立的； 

2.各區(qū)的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的； 

3.各區(qū)完全獨(dú)立，緩沖間可有可無(wú)。如為一個(gè)區(qū)套一個(gè)區(qū)的模式，區(qū)間不能直通，應(yīng)有緩沖間，供換工作服及鞋子用，并保證兩個(gè)區(qū)域間始終處于完全的分隔狀態(tài)； 

4.產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風(fēng)扇或其它抽風(fēng)裝置，維持負(fù)壓。 

實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制 

各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。 

實(shí)驗(yàn)室裝修 

實(shí)驗(yàn)室的墻體，包括頂棚，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好；所有陰角宜采用圓弧形線條過(guò)渡；墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。